第十七期CRISPR/Cas9基因靶向修饰技术学习班

南京 2017年12月22-24日 周五-周日21日报到 (理论与实验相结合)

参会学员免费获得一份CRISPR/Cas9三合一对照质粒

授课讲师寄语：

CRISPR/Cas9基因靶向修饰技术学习班在国内已经连续主办了十六期，由于课程是本人自主设计和编排，信息量大、专业性强、操作性强，深受广大学员好评，当然深受欢迎的同时也吸引了其他同行的模仿和抄袭，这也是对我本人的一种肯定和鼓舞，激励着我去不断调整和优化课程内容。我们每期授课的内容都在不断的更新，以传授CRISPR/Cas9基因靶向修饰最新技术。本班的特点是每位学员必须动手实验操作，空洞的理论效果很差。过去的学习班为了让每位学员都能动手实验操作，不得不控制人数。

经讨论决定2017年12月底继续举办第十七期CRISPR/Cas9基因靶向修饰技术学习班，欢迎新老学员前来参加，我们共同探讨，共同学习。

南京大学模式动物研究所教授：赵庆顺

本期课程安排

第一天上午9:00-12:00

第一讲、基因组靶向修饰技术简介

1、基因组靶向修饰技术发展简史         2、基因组编辑技术的工作原理     3、第一代基因组编辑技术ZFN   4、第二代基因组编辑技术TALEN        5、第三代基因组编辑技术CRISPR/Cas9     

第二讲、CRISPR的设计

1、CRISPR设计的依据及原则    2、常用CRISPR设计软件简介  3、CRISPR的在线设计演练   4、靶向编辑基因的基因型确认（目标基因扩增引物设计策略）及CRISPR的再设计

第一天下午13:00-17:00

第三讲、CRISPR/Cas9基因组编辑工具的制备及向细胞内的递送策略

1、DNA形式的基因组编辑工具的制备与递送   2、RNA形式的基因组编辑工具制备及递送   3、RNP形式的基因编辑工具的制备与递送

实验一： CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（1） CRISPR模板的制备

第四讲、sgRNA活性验证

1、体外法     2、体内法    2.1 插入缺失（Indel）突变检测的基本策略  2.2 基于胚胎反应器的活性验证方法  2.3 基于细胞系的活性验证方法

实验二： CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（2）

CRISPR模板与线性化All-in-One载体的重组、转化、携带基因组编辑工具的转化子的培养

实验三：sgRNA活性体外验证（1）   酶切反应的建立

第二天上午9:00-12:00

第五讲、利用CRISPR技术创建基因组编辑细胞系

1、基因敲入（如点突变和报告基因等）的供体设计原则及实例分析    2、基因组编辑工具导入细胞系的方法（转染与转导）   3、基因组编辑细胞系的筛选及基因型的快速确认      4、敲入和/或敲除基因的功能确认策略

实验四：CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（3）  阳性转化子的快速验证法（PCR法）

实验五：基因组编辑突变体子的基因型鉴定（1）   基因组DNA模板的快速制备、目标基因组DNA片段的PCR扩增

第二天下午13:00-17:00

第六讲、利用CRISPR技术创建基因敲除或敲入动物突变体

1、RNA或RNP基因组编辑工具（和供体）递送至受精卵  2、初建者（F0）体细胞携带靶向突变等位基因的确认    3、基因组编辑突变体（F1）的筛选     4、建系（F2）  5、基因敲除/敲入的功能确认策略  

第七讲、利用CRISPR技术创建基因敲除或敲入植物、真菌 和 细菌突变体

1、基因组编辑工具的制作  2、基因组编辑工具的递送  3、基因组编辑突变体（F1）的的筛选  4、建系（F2）   5、基因敲除/敲入的功能确认

实验六：CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（3）    电泳确认

实验七：sgRNA活性体外验证（2）电泳观测sgRNA活性实验结果

实验八：基因组编辑子等位基因的基因型鉴定（2） 电泳识别基因组编辑突变体

第三天上午9:00-12:00（12:00以后课程结束）

第八讲、基因组编辑技术的脱靶问题

1、脱靶的产生原因    2、脱靶检测   3、解决脱靶问题的方法  4、脱靶问题对不同领域研究者的意义

第九讲、利用CRISPRi或CRISPRa技术调控基因在细胞中的表达

1、dCas9的特征简介   2、运用CRISPR技术调控基因在细胞中表达的基本实验过程   3、CRISPR技术的转录抑制  4、CRISPR技术的转录活化   5、碱基编辑技术简介

第十讲、CRISPR技术的伦理学问题

1、新型基因组编辑技术的发展   2、基因组编辑技术的应用  3、基因组编辑技术的伦理学问题

【主办单位】 上海玮瑜生物科技有限公司 上海服淡信息科技有限公司 

【时间地点】 2017年12月22-24日   南京市 浦口 南京工业大学绿色建筑产业科技园

【住  宿】

为了便于接送、统一指定南京新逸天金丝利酒店，住宿自理

标准间（含早）360元/人  合住180元/人 南京浦口高新区丽景路8号

【收费标准】

 3400元/人 (不含住宿费)  授课期间发放纸质邀请函（盖章）按交费先后顺序确定名额及座位，注册费包含教材、午餐等费用。 

报名方式：

请将回执表复制后填写发送到exosomewy@163.com,  邮件主题注明 CRISPR/Cas9基因靶向修饰技术培训班

CRISPR/Cas9基因靶向修饰技术

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